基因工程实验项目化教程和化学工业出版社9787122417626 下载 pdf 百度网盘 epub 免费 2025 电子版 mobi 在线

《基因工程实验项目化教程》为“十三五”江苏省高等学校重点教材。全书选取L-天冬酰胺酶Ⅱ为目标产品，以大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ基因（ansB）的克隆和表达为主线，按照基因工程的操作流程将相关知识和技能分解为前后连贯的9个项目、34项任务，涉及的内容主要包括核酸分离纯化、聚合酶链式反应（PCR）、DNA体外重组、重组子筛选和鉴定、基因诱导表达与产物分析、琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳以及基因工程实验安全与防护等。本书突出知识、技能和素质的同步提升，深入浅出，图文并茂，适合项目载体、任务驱动、学生主体的行动导向教学。 本书可供职业本科、应用型本科院校生物科学类、生物工程类、药学类专业使用，也可供高职高专生物技术类、制药技术类等相关专业使用，还可以作为相关企事业单位参考用书。

项目一基因工程实验及防护 00pan>

【学】 00pan>

【项目说明】 00pan>

【基础知识】 00pan>

（一）基因工程概述 00pan>

（二）基因工程实验及生物操作规范 005

【项目实施】 010

任务1-1基因工程实验常用的有毒化学试剂及其防护 010

任务1-2掌握基因工程实验常见仪器设备的操作规程和注意事项 014

任务1-3基因工程实验生物危害废品的处理 019

【能力拓展】 02pan>

（一）火灾及 02pan>

（二）触电及急救 026

【实践练032

项目二基因工程实验常用溶液及培养基配制 034

【学】 034

【项目说明】 034

【基础知识】 034

（一）化学试剂的规格和生物试剂的分类 034

（二）溶液浓度的表示、调整和互换 036

（三）溶液的配制 038

（四）生物实验室玻璃器皿的洗涤 042

【项目实施】 044

任务2-1移液器的使用与维护 044

任务2-2配制常用溶液和抗生素 048

任务2-3常用细菌培养基及配制 052

【能力拓展】 055

（一）常用酵母培养基 055

（二）试剂盒 057

（三）体外诊断试剂 059

【实践练062

项目三大肠杆菌基因组DNA的制备 063

【学】 063

【项目说明】 063

【基础知识】 063

（一）核酸的理化质 063

（二）核酸的分离提取原理 067

（三）核酸的固相提取方法 07pan>

【项目实施】 073

任务3-1制备大肠杆菌基因组DNA的操作准备 073

任务3-2SDS法制备大肠杆菌基因组DNA 076

任务3-3CTAB法制备大肠杆菌基因组DNA 079

任务3-4煮沸法制备大肠杆菌基因组DNA 082

【能力拓展】 083

（一）动物基因组DNA的提取 083

（二）植物基因组DNA的提取 085

（三）酵母基因组DNA的提取 085

（四RNA和mRNA的提取 086

【实践练088

项目四PCR扩增大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ基因（ansB） 089

【学】 089

【项目说明】 089

【基础知识】 090

（一）目的基因的分离制备 090

（二）聚合酶链式反应 092

（三）PCR引物设计 095

（四）降落PCR 100

（五）PCR技术的应用 10pan>

【项目实施】 10pan>

任务4-1操作准备 10pan>

任务4-2L-天冬酰胺酶Ⅱ基因（ansB）引物设计 106

任务4-3PCR扩增L-天冬酰胺酶Ⅱ基因（ansB） 110

任务4-4降落PCR优化L-天冬酰胺酶Ⅱ基因（ansB）扩增退火温度 112

【能力拓展】 114

（一）实时荧光定量PCR 114

（二）菌落PCR 122

（三）常用核酸序列数据库 123

【实践练125

项目五质粒pET-28a的制备 126

【学】 126

【项目说明】 126

【基础知识】 126

（一）质粒 127

（二）pET系列质粒 130

（三）质粒DNA的提取方法 132

（四）琼脂糖电泳鉴定质粒DNA 134

（五）质粒DNA浓度和纯度检测 135

【项目实施】 135

任务5-1操作准备 135

任务5-2SDS碱裂解法小量制备质粒pET-28a 137

任务5-3SDS碱裂解法大量制备质粒pET-28a 14pan>

任务5-4少量提取质粒pET-28a的简易方法 142

任务5-5煮沸裂解法快速提取质粒pET-28a 144

【能力拓展】 145

（一）酵母表达载体 145

（二）质粒图谱的绘制 147

（三）质粒资源的获取方式 15pan>

【实践练155

项目六琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA、PCR产物及质粒pET-28a 157

【学】 157

【项目说明】 157

【基础知识】 157

（一）电泳 157

（二）琼脂糖凝胶电泳 158

（三）核酸电泳的指示剂与染色剂 16pan>

（四）核酸电泳的DNA分子量标记 163

【项目实施】 165

任务6-1操作准备 165

任务6-2琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA、质粒pET-28a及PCR产物 166

任务6-3PCR扩增产物的纯化回收 172

【能力拓展】 174

（一）新型核酸荧光染料 174

（二）脉冲场凝胶电泳 177

（三）双相电泳 179

（四）微型凝胶电泳 180

【实践练18pan>

项目七L-天冬酰胺酶Ⅱ基因（ansB）和质粒pET-28a的酶切与连接 182

【学】 182

【项目说明】 182

【基础知识】 182

（一）核酸工具酶及主能 182

（二）限制内切核酸酶 183

（三）DNA连接酶 186

（四）重组DNA分子的构建 188

【项目实施】 188

任务7-1操作准备 188

任务7-2目的基因ansB和质粒pET-28a的双酶切 189

任务7-3目的基因ansB和质粒pET-28a酶切产物的检测、纯化和回收 19pan>

任务7-4目的基因ansB和质粒pET-28a的连接 193

【能力拓展】 195

（一）DNA甲基化酶及其它工具酶 195

（二）Ⅱ型限制内切核酸酶的几种特殊类型 196

（三）目的基因片段与载体分子的连接方法 197

（四）末端转换常用的方法和使用的主要工具酶 198

【实践练199

项目八将重组质粒pET-28a-ansB转化大肠杆菌BL21 0

【学】 0

【项目说明】 0

【基础知识】 pan>

（一）细菌自然转化 pan>

（二）重组 DNA分子的转化 3

（三）受体细胞与感受态 5

【项目实施】 6

任务8-1操作准备 6

任务8-2大肠杆菌BL21感受态细胞的制备 8

任务8-3用热激法将重组质粒pET-28a-ansB导入大肠杆菌BL21 210

任务8-4用电穿孔法将重组质粒pET-28a-ansB导入大肠杆菌BL21 212

【能力拓展】 214

（一）重组DNA转化酵母的方法 214

（二）重组DNA转化动物细胞的方法 215

（三）转基因技术 217

【实践练219

项目九重组子的鉴定及ansB基因表达产物分析 2

【学】 2

【项目说明】 2

【基础知识】 2

（一）重组子的筛选与鉴定 2

（二）目的基因在宿主细胞中的表达 224

（三）基因表达产物的电泳分析及酶活检测 226

【项目实施】 229

任务9-1操作准备 229

任务9-2重组菌中ansB基因的诱导表达和粗提取 23pan>

任务9-3基因表达产物的SDS-PAGE检测 232

任务9-4基因表达产物的酶活检测 235

【能力拓展】 236

（一）蛋白质工程 236

（二）大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ的结构与改造 238

（三）重组菌L-天冬酰胺酶Ⅱ的纯化策略 24pan>

【实践练242

参考文献 244

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书籍介绍

《基因工程实验项目化教程》为“十三五”江苏省高等学校重点教材。全书选取L-天冬酰胺酶Ⅱ为目标产品，以大肠杆菌L-天冬酰胺酶Ⅱ基因（ansB）的克隆和表达为主线，按照基因工程的操作流程将相关知识和技能分解为前后连贯的9个项目、34项任务，涉及的内容主要包括核酸分离纯化、聚合酶链式反应（PCR）、DNA体外重组、重组子筛选和鉴定、基因诱导表达与产物分析、琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳以及基因工程实验安全与防护等。本书突出知识、技能和素质的同步提升，深入浅出，图文并茂，适合项目载体、任务驱动、学生主体的行动导向教学。 本书可供职业本科、应用型本科院校生物科学类、生物工程类、药学类专业使用，也可供高职高专生物技术类、制药技术类等相关专业使用，还可以作为相关企事业单位参考用书。